脐血培养的CIK到第七八天就长不扩增了

小跑

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9 Y* V; f2 t$ O# r  P外周血的能培养到一百亿个，一样的培养体系

小跑

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1 c2 S# e1 J+ j2 c" X
+ [. S% q2 i  \8 L, Y3 p我培养的几乎都是前一周长的很好，甚至比外周血还好。后期就不长了，只有十分之一的一直都培养的很好

小跑

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+ [0 F9 e: ^) N脐血的量我们也是一直要求多采，但是毕竟不能自己参与，每次的量都不理想。补液时机是没问题的。你说的我明白，细胞有一个旁分泌效应。一般情况下我们是两天一补液，但如果细胞长的快，培养基明显变黄，那就不会等两天才补液。

小跑

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+ L; U1 U9 u# u4 v6 n: Q9 @4 O1 o5 V2 G
初始量一般5*10^7是有的，脐血量虽少，但淋巴细胞、单核细胞的比例还是较高的，所以提取的细胞也还可以。7 ]; G4 d* a3 R0 m. [0 `% n
外周血我们用肝素钠和枸橼酸钠抗凝都用过，都可以正常培养。

zhrt

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% _! h9 O; K+ V; Z4 W% r  Z5 P. ?
% Z, D4 M4 y' W) X* ~% C3 T# Q8 `你培养脐血来源的有几例？每一例都这样吗？

小跑

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8 p4 d1 H; f, w! }
, v2 M) }7 W- D9 W# P5 o& t2 s培养了大概十来例，只有一例效果很好，比外周血还好。其他的都有问题。

小跑

看到有的人培养CIK到第七天再次补加CD3单抗，50ng/ml，这样做单抗用的太快了。

zhrt

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这样可以排除染菌的可能性。加血清没有？前期浓度怎样，血清加多了容易老化的，还有就是加液的时机，细胞的密度怎么样？再有做个流式看看培养出的细胞表型，以排除非CIK!

Ivan0108

脐血细胞生长不好几个原因：. k! A2 G- o5 a3 o1 Q5 a
1、枸橼酸钠抗凝剂采血没有什么大的影响，关键是采血时间带分离不能超过12个小时，5小时以内最好。
) [4 w6 L0 d# U0 x0 m2、采血量建议增加，加抗凝剂一起70-80ml为宜。低于50ml的一般很难培养起来，除非采血时间在5小时以内。9 Q; E) j) H6 y1 J, ?
3、细胞接种密度，一般推荐2-3*106/ml最好，接种密度太低会导致细胞生长不良。
! q  x4 V. c" a: X  p4、目前推荐使用培养基种类：gibco、lonza  ，美天旎，corning，日本研究所ALY等细胞均可正常生长。+ B! v8 e: g) w
5、细胞装袋、加液密度：刚开始接触，建议装袋前测密度 保证装袋后细胞密度在0.3-0.8就可以了。 每次加液时，建议计算密度，保证加液后细胞密度维持在1.0-1.5最好。

momoenn

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