脐血培养的CIK到第七八天就长不扩增了

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      实验室做了几年的外周血CIK细胞，长的很好。流程为枸橼酸钠抗凝采血，D0天加干扰素，D1加混合因子，外周血长的很好，但是用脐血就长不好，一直没有找到原因。脐血采血量一般只有30ml左右，抗凝剂有28ml。曾经怀疑过抗凝剂枸橼酸钠混合在血浆中，培养时添加了这样的血浆是否会因枸橼酸钠络合钙镁离子而影响细胞生长。后改用添加胎牛血清或其他外周血血浆培养（仅实验），几乎没有效果。十几份脐带血，只有一份脐带血细胞增殖特别快，其他都停止扩增。有没有做过这方面的培养的给分析一下，谢谢!

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回复 奇幻雪蓝 的帖子4 t$ A5 m2 i' {3 O3 J" ~8 x

0 c  O1 H# S- r1 X1 {; |, v9 f图忘了拍下来，跟平时培养的外周血没什么区别，第一天第二天细胞贴壁，第三天成悬浮的细胞集落，脐血在刚开始的五六天状态是很好的，甚至比外周血还好，一天补一次培养基。但是到第七八天开始，细胞就不怎么扩增了。补加细胞因子也不再增殖。

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用的是TAKARA的551，培养基没问题。而且培养外周血也没问题。

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1 q$ a# p5 h& B" a- k' m6 E: @1 m+ X' u8 x
用的是takara的551，外周血来源的培养的很好

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: Q  W; r( h$ J1 T& K外周血的能培养到一百亿个，一样的培养体系

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我培养的几乎都是前一周长的很好，甚至比外周血还好。后期就不长了，只有十分之一的一直都培养的很好

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: s+ T8 y6 U6 M6 }! o( j" Y脐血的量我们也是一直要求多采，但是毕竟不能自己参与，每次的量都不理想。补液时机是没问题的。你说的我明白，细胞有一个旁分泌效应。一般情况下我们是两天一补液，但如果细胞长的快，培养基明显变黄，那就不会等两天才补液。

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初始量一般5*10^7是有的，脐血量虽少，但淋巴细胞、单核细胞的比例还是较高的，所以提取的细胞也还可以。8 b) `' b2 f* H2 q2 a
外周血我们用肝素钠和枸橼酸钠抗凝都用过，都可以正常培养。

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" z- ?  j) t+ d& ]
& @8 Z  m, D5 H! [! \" K5 ]培养了大概十来例，只有一例效果很好，比外周血还好。其他的都有问题。

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看到有的人培养CIK到第七天再次补加CD3单抗，50ng/ml，这样做单抗用的太快了。