脐血培养的CIK到第七八天就长不扩增了

小跑

      实验室做了几年的外周血CIK细胞，长的很好。流程为枸橼酸钠抗凝采血，D0天加干扰素，D1加混合因子，外周血长的很好，但是用脐血就长不好，一直没有找到原因。脐血采血量一般只有30ml左右，抗凝剂有28ml。曾经怀疑过抗凝剂枸橼酸钠混合在血浆中，培养时添加了这样的血浆是否会因枸橼酸钠络合钙镁离子而影响细胞生长。后改用添加胎牛血清或其他外周血血浆培养（仅实验），几乎没有效果。十几份脐带血，只有一份脐带血细胞增殖特别快，其他都停止扩增。有没有做过这方面的培养的给分析一下，谢谢!

fqc3243

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fqc3243

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18629958729

回复 Ivan0108 的帖子7 v- j% K: D) R# J

  C$ p+ l5 i  D: j0 j$ \8 T请问NK细胞培养时，抗凝剂有影响么，有什么区别呢

18629958729

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0 o) g$ C, o7 B% W# g/ T0 [9 O. ?; b
请问枸橼酸和肝素抗凝对提取单核有什么区别影响吗？

阿秀哥

会不会是培养体系要修改一下，毕竟外周血和脐血是不一样的

jinyangtang

是不是因为脐血在分离这部没做好，红细胞过多影响cik生长

Ivan0108

1.采血时间最好小于8小时。 超过10个小时以上的血培养起来增殖比较困难。基本10个小时内的血，我们重来没遇到过长不起来的。脐血30ml，实际培养到14天CIK细胞总量一般都在60-80亿之间。
. y% c. {* E8 d5 a6 _8 @4 N  {2.仅仅是做CIK细胞培养，抗凝剂差别不是特别大，几种抗凝剂我都用过几千次了，细胞状态都差不多的。
+ }/ f4 m9 [, \, [3 [# C$ B3.分离出来的PBMC接种密度一定要注意，最好在1-3*106/ml，密度太小细胞生长肯定不好。 如果得到的PBMC比较少，那就接种体积小一点，等第三天了在分瓶放一天细胞量起来了再操作。
. t, @. o: [: {7 B$ n4.培养过程中不要每天加液，最好是隔天加一次。加液时，一定要根据细胞密度进行。一次加多了，细胞生长就会慢很多，加太少细胞营养跟不上。

mtdj1314

我现在也遇到同样的问题，外周血培养CIK细胞长势极好，而且很稳定，但是培养一例脐血来源的CIK则效果不佳，细胞越来越少的感觉。反复思考，莫非是枸橼酸钠的缘故？现在考虑更换抗凝剂试一试。

momoenn

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